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上海錦玟:二氧化碳培養(yǎng)箱在動物細胞培養(yǎng)中的應用

更新時間:2019-06-30      點擊次數:2079

    二氧化碳培養(yǎng)箱

    動物細胞多數需要微堿性環(huán)境,pH約為7.2~7.4,以不超出6.8~7.6范圍為宜。緩沖系統對于維持培養(yǎng)基的pH是至關重要的,動物培養(yǎng)基的pH是通過模擬血漿中天然存在的

    CO2/NaHCO3(實際是CO32-/HCO3-)系統來控制的。配置動物培養(yǎng)基時,會將NaHCO3作為等滲溶液的一部分添加到培養(yǎng)基。

     一方面,由于NaHCO3不穩(wěn)定,易分解產CO2,CO2從培養(yǎng)液中游離到空氣中,會使培養(yǎng)液pH升高;另一方面,細胞呼吸產生的CO2以及代謝產生的酸性代謝產物,又使pH降低。

       在培養(yǎng)開始的一段時間,細胞較少,呼吸產生的CO2較少,前者作用大于后者,培養(yǎng)液中pH可能會明顯上升,這就需要培養(yǎng)箱中補充一定量的CO2來維持pH;而后期隨著細胞數目增多,細胞產生CO2增加,后者作用便大于前者,此時,培養(yǎng)基中pH可能會明顯降低,盡管大多動物細胞耐酸能力比耐堿能力略強一些,但如果超過警戒值,則需要更換培養(yǎng)基進行傳代。

     培養(yǎng)液中一般加入酚紅作為pH指示劑,所以此培養(yǎng)基中顏色變化是:櫻桃紅色→粉紅色→黃色。如果使用培養(yǎng)基之前,先通入CO2,或在CO2培養(yǎng)箱內進行開放式培養(yǎng),則培養(yǎng)基顏色變化是:櫻桃紅色→黃色。如果培養(yǎng)基變黃,則需要及時更換培養(yǎng)基。

    培養(yǎng)箱中CO2濃度應與培養(yǎng)液中NaHCO3濃度相平衡,如果培養(yǎng)箱中CO2濃度設定在5%,培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量應為1.97 g/L;如果CO2濃度維持在10%,則NaHCO3的加入量應為3.95 g/L。

     動物細胞對pH變化比較敏感,但植物細胞就沒那么嬌弱了,培養(yǎng)過程中pH的變化幅度只要別太大,對它并不會造成明顯損傷。

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